免疫组化服务常见问题解答：抗体选择、染色质量怎么把控？

发布日期： 2025-12-09

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　　免疫组化服务作为生物医学研究的核心技术之一，广泛应用于肿瘤诊断、蛋白定位及机制探索。但在实际服务中，抗体选择与染色质量把控常成为用户关注的焦点。本文结合实践经验，解答两大核心问题。

　　一、抗体选择：精准匹配是关键

　　抗体是免疫组化的“灵魂”，其选择直接影响结果可靠性。需重点关注三点：

　　1.种属与宿主匹配：一抗需与目标组织物种同源（如检测小鼠组织选抗小鼠一抗），避免交叉反应；二抗需与一抗宿主种属对应（如一抗为兔源，二抗选抗兔IgG）。

　　2.验证数据优先：优先选择经文献验证或厂家提供阳性/阴性对照数据的抗体，尤其关注“适用IHC”标注。部分抗体虽在WB中有效，但可能因表位遮蔽或亲和力不足导致IHC失效。

　　3.应用场景适配：根据样本类型（冰冻切片/石蜡切片）调整抗体稀释度——石蜡切片因抗原修复需求，可能需更高浓度抗体；若检测低丰度蛋白，可尝试信号放大系统（如聚合物法二抗）。

　　二、染色质量把控：全流程细节决定成败

　　染色质量不稳定常源于操作疏漏，需从以下环节严格管控：

　　•样本前处理：石蜡切片需优化脱蜡（梯度酒精）、抗原修复（热修复pH值/时间）；冰冻切片注意快速固定防冰晶损伤。内源性干扰（如过氧化物酶、生物素）需用H₂O₂或封闭血清预处理。

　　•实验条件标准化：抗体孵育温度（4℃过夜或37℃1小时）、洗涤强度（PBS/Tween浓度）、显色时间（DAB需镜下监控）需统一，避免因批次差异导致信号波动。

　　•对照设置不可少：每批实验必须包含阳性对照（已知表达目标蛋白的组织）、阴性对照（空白二抗或同型IgG替代一抗）及空白切片（无一抗），通过对照排除非特异性染色或试剂污染。

　　•结果判读客观化：结合镜下定位（胞膜/胞质/核）与信号强度（0-3+分级），避免主观偏差；必要时用图像分析软件量化阳性率与平均光密度。